O destino da Ilha de Roanoke, onde se situou a primeira tentativa de Inglaterra de estabelecer uma colónia permanente na América do Norte, permanece um dos maiores mistérios da história. Embora grande parte da discussão em torno de Roanoke se foque no desaparecimento da "Colónia Perdida" no final do século XVI, uma questão frequentemente ignorada é se os espanhóis alguma vez tentaram invadir ou atacar o povoamento. Dada a feroz rivalidade entre Inglaterra e Espanha durante este período, é uma consideração válida.
A Espanha, enquanto potência colonial dominante nas Américas na época, estava bem ciente das tentativas de Inglaterra de estabelecer um ponto de apoio no Novo Mundo. Os espanhóis viam estes esforços como uma ameaça direta às suas reivindicações territoriais, particularmente na Flórida e nas Caraíbas. A pirataria inglesa, liderada por figuras como Sir Francis Drake, já tinha tensionado as relações entre as duas nações, e a Espanha tinha todas as razões para perturbar as ambições coloniais inglesas.
Os registos históricos sugerem que as autoridades espanholas tinham conhecimento do povoamento de Roanoke e consideraram lançar um ataque. Relatórios de inteligência de espiões espanhóis indicavam que Inglaterra estava a tentar estabelecer uma base ao longo da costa norte-americana, potencialmente como uma base de operações para ataques de corsários contra navios espanhóis. No entanto, embora a Coroa espanhola tenha ordenado missões de reconhecimento e existissem relatos de navios espanhóis a explorar a região, não ocorreu nenhuma invasão definitiva da Ilha de Roanoke. Os espanhóis estavam mais focados em proteger os seus próprios territórios e em repelir as incursões inglesas nas Caraíbas e na Flórida, nomeadamente em Santo Agostinho, que Drake atacou em 1586.
Em última análise, o desaparecimento de Roanoke não se deveu a um ataque espanhol. A colónia já estava a debater-se com escassez de mantimentos, conflitos com grupos indígenas e falta de apoio por parte de Inglaterra. Quando o governador John White regressou em 1590, o povoamento estava abandonado, com apenas a palavra "CROATOAN" esculpida num poste como uma pista enigmática. Embora os espanhóis pudessem ter constituído uma ameaça potencial, o declínio de Roanoke deveu-se, mais provavelmente, a dificuldades internas do que a um ataque militar externo.
